概述
●ELISA是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)又可以用于少量標(biāo)本的檢測(cè)，既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。ELISA的影響因素較多，加強(qiáng)質(zhì)量管理才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。
分析前質(zhì)控
●人員培訓(xùn) 實(shí)驗(yàn)是***作的，因此檢驗(yàn)人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟練掌握本專業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識(shí)：
◎檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理 （ELISA原理）；
◎臨床意義；
◎熟悉檢測(cè)技巧，了解易出差錯(cuò)的環(huán)節(jié)及難點(diǎn)；
◎熟悉檢測(cè)試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成）；
◎ 熟悉檢測(cè)儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識(shí)。
◎某些特殊項(xiàng)目的檢測(cè)如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。
分析前質(zhì)控
◎ELISA原理：1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)發(fā)展為ELISA技術(shù)。
特點(diǎn) ：在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"
酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì)，進(jìn)行信號(hào)放大；
有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過程；
靈敏度特異性相對(duì)較高。
局限性：只能檢測(cè)到ng水平
精密度差（批內(nèi)CV15-20%）；
線性范圍窄（一個(gè)數(shù)量級(jí)）；
存在"HD-HOOK"效應(yīng)。
ELISA原理
●根據(jù)檢測(cè)目的和操作步驟不同有三種基本方法。
●雙抗體（原）夾心法 檢測(cè)抗原（體）的常見方法，應(yīng)用針對(duì)抗原兩個(gè)不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標(biāo)抗體檢測(cè)溶液中的抗原（適用于二價(jià)以上抗原,不能測(cè) 小分子半抗原）。
●間接法 檢測(cè)抗體的方法，利用酶標(biāo)記的抗抗體（第二抗體）檢測(cè)已與固相抗原結(jié)合的抗體。
●競(jìng)爭(zhēng)法 檢測(cè)抗原或小分子半抗原、抗體，以測(cè)抗原為例，使待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，結(jié)果如待測(cè)抗原含量越多，與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原就越少，顯色越淺，二者呈負(fù)相關(guān)。
ELISA原理
今后的發(fā)展方向
●聚苯乙烯表面的高級(jí)制備。已有的技術(shù)是酰肼化（聚二氟乙叉，PVDF）；生物素化；預(yù)包被多聚賴氨酸等，均是***產(chǎn)品。
●酶促信號(hào)放大的改變，如酶促熒光、酶促化學(xué)發(fā)光等。
ELISA臨床意義
●各型肝炎的特征及標(biāo)志物
乙肝二對(duì)半的模式及臨床意義
HBsAg HBeAg HBcAb-IgG HBcAg-IgM HBeAb HBsAb 臨床意義
+ + - - - - 急性HBV感染早期HBV復(fù)制活躍
+ + + + - - 急慢性HBV感染，HBV復(fù)制活躍
+ - + + - - 急慢性HBV感染，HBV復(fù)制中躍
+ - + + + - 急慢性HBV感染，HBV復(fù)制低躍
+ - + - + - HBV復(fù)制停止或極低
- - + + - - 平靜的HBV攜帶狀態(tài)，HbsAg
- - + - - - HBV既往感染，未產(chǎn)生抗-HBs
- - + + + - 抗HBs出現(xiàn)前期，HBV復(fù)制低
- - + - + + HBV感染恢復(fù)期
- - + - - + HBV感染恢復(fù)期
+ + + + - + 不同亞型ＨＢＶ再感染
+ - - - - - ?。龋拢郑模危琳?br />
- - - - - ?。 〔『蠡蚪臃N疫苗后獲得免疫
試劑盒選擇
◎衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標(biāo)簽的產(chǎn)品，試劑應(yīng)從靈敏度，特異性，精密度，穩(wěn)定性，簡便性，安全性及經(jīng)濟(jì)性作出全面的評(píng)價(jià)。
◎靈敏度：有二層含義，1）為試劑檢出被檢物質(zhì)的最低量的能力；2）為試劑對(duì)人群或大量樣品中陽性檢出的能力（假陰性越少越好），取決于包被物的全面性。
◎特異性：指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力（無假陽性），取決于包被抗原（體）及標(biāo)記抗原（體）的純度及特異性。
◎精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍
試劑盒選擇
◎穩(wěn)定性：試劑在規(guī)定條件下能儲(chǔ)存的時(shí)間，一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存，定期測(cè)定其靈敏度，特異性和精密度等指標(biāo)，直到其質(zhì)量指標(biāo)開始下降為止，通常認(rèn)為37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于4-10℃保存一個(gè)半月。
◎簡便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下，實(shí)驗(yàn)和測(cè)定步驟越少越好，在定性試驗(yàn)中結(jié)果判斷簡單明了，）定量試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算也應(yīng)簡單。
◎安全性：指試劑對(duì)操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。
◎經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本而市場(chǎng)價(jià)格比較合理。
試劑盒選擇
◎試劑評(píng)價(jià)需要有權(quán)威的血清考核盤（Panel）進(jìn)行檢測(cè)，一般實(shí)驗(yàn)室不易從生檢所或臨檢中心取得，每進(jìn)一次試劑評(píng)價(jià)一次也很麻煩。可以通過間接的信息對(duì)試劑進(jìn)行選擇。
◎根據(jù)該試劑生檢所批批檢定報(bào)告，了解其質(zhì)量水平，按照質(zhì)量計(jì)劃選擇靈敏度高的或特異性高的試劑；
◎通過詢問試劑包被物的組成，如原料來源（基因工程或合成多***），片段的組合（按比例混合或化學(xué)合成），片段的長短等判斷試劑的優(yōu)劣；
◎參考室間質(zhì)評(píng)評(píng)價(jià)報(bào)告中對(duì)試劑的評(píng)價(jià)結(jié)果，這比較客觀公正，因?yàn)榻y(tǒng)計(jì)數(shù)字均來自各參評(píng)醫(yī)院，反映了試劑在某一地區(qū)的使用情況；
◎根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的試劑評(píng)價(jià)結(jié)果，了解市場(chǎng)上試劑的質(zhì)量優(yōu)劣。
儀器質(zhì)控
為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱），洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。
◎移液器：ELISA加樣量小（5-100ｕl），其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計(jì)算吸量是否準(zhǔn)確，一般應(yīng)在±10%以內(nèi)；
◎水浴箱 經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)）實(shí)測(cè)溫度是否一致，允許有±1℃的誤差；
◎洗板機(jī) 每個(gè)廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過2ul ，人工扣板時(shí)，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞；
◎酶標(biāo)儀 經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測(cè)校正，使其保持良好的工作性能。
附1：酶標(biāo)儀校正程序
◎?yàn)V光片波長精度檢查：將不同波長的濾光片從酶標(biāo)儀上卸下，用UV-2201型紫外-可見分光光度計(jì)（波長精度±0.3nm）于可見光區(qū)對(duì)每個(gè)濾光片進(jìn)行掃描，其檢測(cè)值與標(biāo)定值之差為濾光片波長精度。
◎通噵差與孔間差檢測(cè)：通道差檢測(cè)是取一只酶標(biāo)板小孔杯（杯底須光滑，透明，無污染以酶標(biāo)板架作載體， 將其（內(nèi)含200ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.500A左右）置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置，蒸溜水調(diào)零，1于490nm處連續(xù)測(cè)三次,觀察其不同通道的檢測(cè)器測(cè)量結(jié)果的一致性，可用極差值來表示?？组g差的測(cè)量是選擇同一廠家，同一批號(hào)酶標(biāo)2板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.100A左右）先后置于同一通道，蒸溜水調(diào)零,于490nm處檢測(cè)，其誤差大小用±1.96s衡量。
n 零點(diǎn)飄移（穩(wěn)定性觀察）：取8只小孔杯分別置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置，均加入200ul蒸溜水并調(diào)零，于490nm處每隔30分鐘測(cè)一次，觀察各個(gè)通道4小時(shí)內(nèi)吸光度的變化。
附1：酶標(biāo)儀校正程序
◎精密度評(píng)價(jià)：每個(gè)通道3只小杯分別加入200ul高中低3種不同．濃度的甲基橙溶解，蒸溜水調(diào)零，于490nm作雙份平行測(cè)定，每日測(cè)二次（上下午各一次），連續(xù)測(cè)定20天。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度，日內(nèi)批精密度,日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。
◎線性測(cè)定：用電子天平精確稱取甲基橙配制5個(gè)系列的溶液，于490nm平行測(cè)8次，取其均值。計(jì)算其回歸方程，相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差s，并用±1.96s表示樣品測(cè)量的誤差范圍.雙波長測(cè)定評(píng)價(jià)：取一分甲基橙溶液，分別加入3種不同濃度的溶血液（測(cè)定波長為490nm，校正波長為585nm），先后于8個(gè)通道檢測(cè)，每個(gè)通道測(cè)3次，51比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，以考察雙波長消除干擾組分的效果。
◎一般酶標(biāo)儀無585nm濾光片，可選用550nm或630nm濾光片。450nm 濾光片的檢定選用普魯蘭溶液（校正波長為630nm）
常見酶標(biāo)儀評(píng)價(jià)
標(biāo)本的采集和保存
◎可用作ELISA的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清，血漿，各種積液），分泌物（如唾液）和排瀉物（如糞便，尿液）均可作為標(biāo)本以測(cè)定其中的抗原或抗體成分，一般使用血清。
n 標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)盡量避免溶血，因紅細(xì)胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì)干擾立可讀方法的結(jié)果，可造成假陽性；長菌的標(biāo)本同樣的道理易產(chǎn)生假陽性。
◎抗凝不完全的標(biāo)本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝劑。
◎標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長易導(dǎo)致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深，一般血清置4℃冰箱5天內(nèi)完成測(cè)試。如需保存一周以上則要-20℃冰凍保存，融解時(shí)應(yīng)上下顛倒充分混勻，同時(shí)避免氣泡。
◎ELISA的靈敏度>1ng/ml水平上,標(biāo)本間的污染要盡量避免，尤其不應(yīng)與生化試驗(yàn)用同一管標(biāo)本.最起碼應(yīng)先做免疫后做生化.
附：內(nèi)外干擾物質(zhì)的影響分析
溶血 脂濁 RF 自身抗體 AFP 補(bǔ)體 肝素 EDTA
A 0.165 0.200 0.250 0.264 0.186 0.146 0.183 0.126
S 0.023 0.016 0.007 0.029 0. 010 0. 007 0.019 0.013
A對(duì)照0.151 0.195 0.195 0.195 0 .116 0.116 0.116 0.116
S 0.038 0.008 0. 008 0.008 0.018 0.018 0.018 0.018
P > 0.05 > 0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 <0.01 <0.01
分析中質(zhì)控
◎ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果受操作影響很大，每個(gè)步驟包括加樣，溫育，洗滌，顯色，酶標(biāo)儀讀數(shù)均應(yīng)認(rèn)真負(fù)責(zé)才能充分發(fā)揮ELISA的高靈敏，強(qiáng)特異的優(yōu)點(diǎn)。
◎因此,應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。
加樣
◎加樣應(yīng)用微量移液器（加樣槍）按規(guī)定的量加入微孔板的1/3處避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。
◎每次加樣應(yīng)更換吸嘴，做到一人一吸頭，以免發(fā)生交叉污染;干吸頭預(yù)先在血清中抽吸三次。
◎樣本稀釋，目的是為了減少非特異性反應(yīng)，所以一定要先加稀釋液后加樣本，特別注意加樣后要在微量振蕩器上振蕩30秒鐘，同時(shí)注意防止液體溢出。如后面操作步驟中加二種以上試劑時(shí)均需振蕩混勻。
◎如用滴瓶滴加試劑應(yīng)先將滴瓶搖勻并擠去第一滴有氣泡的試劑后加樣。
溫育
◎抗原抗體反應(yīng)需要在一定溫度下（37°C），經(jīng)過一定的時(shí)間才能達(dá)到反應(yīng)的平衡點(diǎn)
◎ELISA邊緣效應(yīng)是由溫育形成的。所以溫育一般采用能 使反應(yīng)液溫度迅速達(dá)到平衡的水浴法。一種放在水浴箱的隔板上，另一種是放在溫箱的濕盒里。水要浸至板條的1/3處，不可將板條疊加放置。
◎邊緣效應(yīng)（2ng/mlHBsAg一步法三種不同溫育法的結(jié)果）
洗滌
◎ELISA是靠洗滌來達(dá)到分離結(jié)合與未結(jié)合抗原抗體復(fù)合物及酶標(biāo)記物的目的，同時(shí)洗滌也可將非特異吸附的蛋白質(zhì)的干擾以及血球、細(xì)菌中的酶干擾清除掉。
◎手工洗滌一般采用浸泡方法：1）甩去孔內(nèi)反應(yīng)液；
2）用洗滌液過洗一遍（即注滿孔后即甩去）；
3）微孔重新注滿洗液后浸泡2-3分鐘，間歇搖動(dòng)；
4）甩去孔內(nèi)液體，拍板，用紙吸干。
重復(fù)以上操作至少5次。注意各種試劑盒的洗滌液盡量不要混用。
◎洗板機(jī)洗板一定要預(yù)先把板架放平，使洗板機(jī)上的每個(gè)放液和吸液纖孔都能一致地插入孔底，將孔內(nèi)液體全部吸干，同時(shí)要設(shè)置一定的浸泡時(shí)間。如出現(xiàn)機(jī)洗后拍板有較多殘留液時(shí)應(yīng)再用手工洗2次以上。關(guān)機(jī)前要用蒸溜水沖洗管道，避免堵孔。
顯色
◎HRP催化底物的一步呈色反應(yīng)，同樣需要一定的時(shí)間和溫度，
◎ 一定要按照說明書規(guī)定的時(shí)間溫度（一般為37°C，10-15分鐘）恒定反應(yīng)后終止
◎或根據(jù)臨界值質(zhì)控血清吸光度值達(dá)0.2左右使的時(shí)間而恒定反應(yīng)時(shí)間.
酶標(biāo)儀判讀結(jié)果
◎顯色反應(yīng)終止后應(yīng)立刻比色（30分鐘內(nèi)）。
常見的顯色系統(tǒng)有OPD和TMB二種，以后者最為常見，而TMB酸不易終止因此必須盡快比色以免影響結(jié)果。OPD終止后顯棕色，測(cè)定波長為490nm；
TMB終止后顯黃色，測(cè)定波長為450nm，
二種底物的校正波長均用630nm。
使用雙波長的優(yōu)點(diǎn)可以消除反應(yīng)板條上的劃痕手印的干擾。同時(shí)要注意反應(yīng)板應(yīng)用紙吸干后才能置酶標(biāo)儀中比色，否則吸光度易出現(xiàn)負(fù)值或損壞濾光片。
報(bào)告方式
◎定性試驗(yàn) 國內(nèi)外為便于統(tǒng)一計(jì)算，一律按S/C.O方式報(bào)告，S為標(biāo)本A值，C.O即Cut Off值（陽性判定值）
◎夾心法和間接法以S/C.O≥1為陽性；
竟?fàn)幏ㄅc中和法以S/C.O﹤1為陽性
◎Cut Off的計(jì)算公式以試劑盒說明書的為準(zhǔn)常見的有：
◎A） C.O=2.1×N（當(dāng)N不足0.05時(shí)按0.05計(jì)），
◎此公式由P/N>2.1換算而來，常用于夾心法。
◎B） C.O=0.5×N，從抑止率公式換算而來，
◎常用于竟?fàn)?，中和?br />
◎C） C.O=N+C（C為常數(shù)），用于間接法。
◎D） C.O=C×P+N（C為常數(shù)），用于間接法。此公式最客觀，但對(duì)生產(chǎn)廠家要求很高，陰陽性對(duì)照測(cè)定值要基本恒定。
報(bào)告方式
定量分析 用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋，ELISA測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以絕對(duì)量或單位表示。
ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線每次都要和待測(cè)標(biāo)本做在同一塊板上。
◎現(xiàn)有的ELISA定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線只有在較窄的濃度范圍內(nèi)成直線，要得到精確的結(jié)果實(shí)屬不易。
因此嚴(yán)禁用定性試劑盒做定量分析。
灰區(qū)概念
把定量分析的正常值范圍引入定性分析建立灰區(qū)概念，即將CO值上下的一段區(qū)域定為陽性可疑，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)或換試劑重測(cè)以確定其陰陽性，如仍落在灰區(qū)范圍內(nèi)則報(bào)告+（陽性）。
灰區(qū)概念對(duì)血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血員篩查尤為重要。
灰區(qū)的設(shè)置有二種：
1）C.O×（1±CV），
CV為該試劑的批內(nèi)CV （一般在15-20%間）；
2）C.O±2s，s為實(shí)驗(yàn)室做室內(nèi)質(zhì)控ROC的s。
高值鉤鐮效應(yīng)（HD-HOOK）
◎在二位點(diǎn)夾心ELISA中，其劑量反應(yīng)曲線的高劑量（HIGH DOSE，HD）區(qū)段，線性走向不是呈平臺(tái)狀無限后延，而是向下彎曲狀，似一只鉤子或一把鐮刀（HOOK），MILES（1974） 根據(jù)此現(xiàn)象寫實(shí)性地稱之為"HD-HOOK"效應(yīng)。產(chǎn)生該現(xiàn)象的分子機(jī)理有"分子變構(gòu)說"和"濃度效應(yīng)"等推論。
◎一步法和二步法均存在， 只是前者出現(xiàn)的更早些，大多數(shù)是高值低吸光度，很少陰性結(jié)果。
高值鉤鐮效應(yīng)（HD-HOOK）
質(zhì)量控制
（Quality Control，QC）
◎英國Whitehead教授建議生化檢驗(yàn)工作的質(zhì)量控制分為4個(gè)步驟：最佳條件的變異（OCV）；常規(guī)條件的變異（RCV）；病人結(jié)果的統(tǒng)計(jì)（SPR）；室間質(zhì)量控制（EQA）。前三個(gè)步驟即室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC）。
◎在GLP概念里QC即指IQC，其定義為：由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本室工作的可靠性，旨在監(jiān)測(cè)和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高批內(nèi)批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定檢驗(yàn)報(bào)告是否可靠或可否發(fā)出的一項(xiàng)工作。
◎免疫測(cè)定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此QC手段不能照搬生化模式。分為定性和定量二個(gè)方面。
質(zhì)量控制
（Quality Control，QC）
定性試驗(yàn)：ELISA定性試驗(yàn)的臨床意義在于是否檢出病原體，與檢出量無關(guān)，因此QC要保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。生化的質(zhì)控圖方法僅能觀察靈敏度而無法監(jiān)控特異性。
建議使用臨界值血清界定法：將試劑盒所設(shè)的陰陽性對(duì)照作為內(nèi)對(duì)照指示反應(yīng)；另設(shè)臨界值、高值質(zhì)控血清，正常人血清作為外對(duì)照，與標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)，臨界值S/C.O≥1，高值質(zhì)控血清S/C.O≥10，正常人血清A值在0.05~0.07之間。
◎陽性質(zhì)控血清失控（臨界值為靈敏度，高值為"HOOK"效應(yīng)監(jiān)控）應(yīng)重做陰性標(biāo)本；陰性對(duì)照失控應(yīng)重做陽性標(biāo)本。
◎以表格式記錄每塊板的外對(duì)照實(shí)驗(yàn)結(jié)果，作為QC資料存檔。
質(zhì)量控制（Quality Control）
◎定量試驗(yàn)：ELISA定量試驗(yàn)常見于腫瘤因子（如AFP，CEA，CA系列），激素類，免疫球蛋白類，這些物質(zhì)在體內(nèi)有一定的量（正常范圍），超出這個(gè)量才呈病理情況，故需定量測(cè)定。定量試驗(yàn)的質(zhì)控方法可參考生化方式。
質(zhì)量控制（Quality Control）
"即刻性"質(zhì)控：在開始進(jìn)行質(zhì)控時(shí)，只需要有3個(gè)質(zhì)控血清測(cè)定值即可進(jìn)行質(zhì)控。當(dāng)這組數(shù)據(jù)擴(kuò)大到20次有效值時(shí)就可以計(jì)算RCV的X，s。方法：
（1）先將測(cè)定值從小到大排列，X1最小，Xn最大；
◎（2）計(jì)算X和s；
◎（3）計(jì)算SI上限值和下限值。
◎SI上=（X最小-X）/S， SI下=（X最大-X）/S
◎?qū)φ誗I表，檢查是否出控，
SI上、下限≤規(guī)定值，在控；
SI上或下限>規(guī)定值，失控。
質(zhì)量控制（Quality Control）
SI值表（即刻性質(zhì)控）
N 3 4 5 6 7 8 9 10 11
N（3s） 1.15 1.49 1.75 1.94 2.10 2.22 2.32 2.41 2.48
N （2s）1.15 1.46 1.67 1.82 1.94 2.03 2.11 2.18 2.23
12 13 14 15 16 17 18 19 20
2.55 2.61 2.66 2.71 2.75 2.79 2.82 2.85 2.88
2.29 2.33 2.37 2.41 2.44 2.47 2.50 2.53 2.56
室內(nèi)質(zhì)控血清的制備：
◎收集陽性血清（無明顯溶血、黃膽、脂肪血和污染血清,到一定量（夠本室使用3-6個(gè)月的量）；
◎傳染性病毒陽性需經(jīng)56℃、10小時(shí)滅活后使用；
◎過濾，除纖維沉淀物；
◎稀釋，用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀釋；
◎測(cè)定值，與定值參考品進(jìn)行對(duì)比、求值，一般定在Cut Off值附近的陽性值；
◎分裝小瓶（每日用量），加蓋、貼簽，-20℃凍存?zhèn)溆谩?br />
不使用質(zhì)控血清的室內(nèi)質(zhì)控
◎操作過程的質(zhì)量控制（分析前、后質(zhì)控）
◎試劑盒陰陽性對(duì)照或標(biāo)準(zhǔn)濃度系列。
陰對(duì)≤0.05 陽對(duì)-陰對(duì)>0.8 標(biāo)準(zhǔn)濃度落在2s
陽對(duì) > 0.80 ; 范圍內(nèi)
◎病人資料統(tǒng)計(jì)，連續(xù)觀察病人檢測(cè)結(jié)果的資料，并分析該病人其他化驗(yàn)結(jié)果的關(guān)系。
質(zhì)量保證
（Quality Aprovment，QA）
◎質(zhì)量保證的核心內(nèi)容是室間質(zhì)評(píng)。室間質(zhì)評(píng)是一種回顧性評(píng)價(jià)，主要控制試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，也是某些定量試驗(yàn)量值朔源。
評(píng)價(jià)方法
◎1） 發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行調(diào)查，這是目前國內(nèi)外常見的形式，采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實(shí)驗(yàn)室，各實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的日期進(jìn)行檢驗(yàn)，并將結(jié)果報(bào)至組織者（部、省臨檢中心）。組織者通過統(tǒng)計(jì)分析，再將評(píng)價(jià)結(jié)果寄回實(shí)驗(yàn)室，使其了解工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)問題，提高質(zhì)量。其缺點(diǎn)為由于各實(shí)驗(yàn)室吃小灶或互相打電話修改結(jié)果而達(dá)不到真正評(píng)價(jià)作用。
◎2） 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，事先不通知，臨時(shí)派出人員到各實(shí)驗(yàn)室，規(guī)定采用常規(guī)方法，檢測(cè)一組標(biāo)本，進(jìn)行評(píng)價(jià)。這種方法可以解決實(shí)際問題，進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)，組織者常因人力、物力的原因而不能經(jīng)常性進(jìn)行。
成績計(jì)算方法
◎定性試驗(yàn)：檢驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致，得100分，錯(cuò)誤不得分，總計(jì)實(shí)驗(yàn)室的得分。從全部參評(píng)單位的得分中求出該批質(zhì)控物平均分（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（s），再通過公式計(jì)算出每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的得分比值（SI）
SI=（實(shí)驗(yàn)室得分-平均分X）/平均標(biāo)準(zhǔn)差（s）
SI在0.0-0.9間為良好,1.0-1.9間為優(yōu)秀,SI為負(fù)值時(shí)數(shù)值越大成績?cè)讲睢?br />
◎定量試驗(yàn)
SI=（實(shí)驗(yàn)室測(cè)定值-預(yù)期值X）/預(yù)期值的標(biāo)準(zhǔn)差s SI越小，表明越靠近靶值，成績?cè)胶谩?br />
0-1.0為優(yōu)秀,1.1-2.0為良好,>2.0為差。SI無正負(fù)之分
質(zhì)量改進(jìn)
（Quality Improvement，QI）
◎質(zhì)量改進(jìn)的建議來源于三方面：
◎（1）室內(nèi)質(zhì)控：提示實(shí)驗(yàn)的精密度差，應(yīng)規(guī)范各項(xiàng)操作；
◎（2）室間質(zhì)評(píng)：提示實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性差，應(yīng)改進(jìn)設(shè)備的準(zhǔn)備或更換試劑；
◎（3）病人或醫(yī)生的報(bào)怨：提示實(shí)驗(yàn)的偶然誤差，應(yīng)分析實(shí)驗(yàn)的質(zhì)控過程是否達(dá)標(biāo)。
記錄
◎所有實(shí)驗(yàn)的原始資料均應(yīng)存檔； 所有的記錄均應(yīng)規(guī)范登記在冊(cè)； 原始登記表應(yīng)記錄試劑來源、批號(hào)；質(zhì)控血清的來源及測(cè)定值并注明是否在控；簽上實(shí)驗(yàn)者姓名及審核者姓名。
◎如試驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床診斷有決定意義，其樣本應(yīng)保留，至少與病歷保存期一致。 |
